猴子熱休克蛋白糖蛋白96試劑盒操作步驟

猴子熱休克蛋白糖蛋白96試劑盒操作步驟 

    實(shí)驗(yàn)開始前，請?zhí)崆芭渲坪盟性噭?；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時(shí)，均應(yīng)用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。建議各實(shí)驗(yàn)室在操作前先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)以建立佳稀釋倍數(shù)。 
    1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100ul，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。 
    為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。 
    2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100ul（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。 
    3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。 
    4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100ul，37℃，60分鐘。 
    5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。 
    6. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。 
    7. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。 
    8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后立即進(jìn)行檢測。